Langkah mudah menghitung spora menggunakan hemasitometer

Pengertian Hemasitometer

Hemasitometer (Haemocytometer) adalah alat yang digunakan untuk menghitung konsentrasi sel. Prinsip kerja hemasitometer adalah menghitung seberapa banyak sel pada volume dibawah kaca penutup.

Keunggulan hemasitometer adalah dapat digunakan untuk menghitung sel secara cepat dan untuk konsentrasi sel yang rendah.

Ruang hitung di hemasitometer terdiri dari 9 kotak besar dengan luas 1 mm2. Satu kotak besar di tengah, dibagi menjadi 25 kotak sedang dengan panjang 0,2 mm. Satu kotak sedang dibagi lagi menjadi 16 kotak kecil. Dengan demikian satu kotak besar tersebut berisi 400 kotak kecil. Tebal dari ruang hitung ini adalah 0,1 mm. Sel yang tersuspensi akan memenuhi volume ruang hitung tersebut sehingga jumlah sel persatuan volume dapat diketahui.

Berikut ini video tutorial bagaimana hemasitometer bekerja

Hal-hal yang perlu disipakan sebelum menghitung spora

Sebelum melakukan penghitungan spora menggunakan hemasitomter, ada beberapa hal yang perlu kita siapkan:

1. petridish yang berisi hifa jamur yang akan dihitung

2. air steril/ garam fisiologis

3. hemasitometer

4. mikrometer pipet

5. mikroskop

Penampakan hifa Fusarium oxisporum fsp. cubense di petridish
(sumber: dokumentasi pribadi)

Spora Fusarium oxisporum fsp. cubense di bawah mikroskop
(sumber: dokumentasi pribadi)

Langkah

Langkah-langkah yang dilakukan untuk menghitung spora jamur menggunakan hemasitometer adalah:

1. Tambahkan 10 ml air steril kedalam petridish.

2. Panen dengan mnggunakan L glass.

Penampakan spora Fusarium oxisporum fsp. cubense di chamber hemasitometer
(Sumber: dokumentasi pribadi)

3. Pindahkan larutan suspensi hasil panenan kedalam wadah steril. Kemudian homogenkan larutan suspensi tersebut menggunakan vortex. Larutan suspensi ini digunakan sebagai larutan stock.

4. Lakukan pengenceran pada larutan suspensi supaya lebih mudah dalam menghitung spora. Pengenceran dilakukan dengan cara mengambil 1 ml larutan suspensi menggunakan mikrometer pipet, kemudian pindahkan ke dalam 9 ml air steril. Homogenkan larutan menggunakan vortex. Larutan yang kita dapatkan ini sebagai pengenceran 10^-1.

5. Lakukan prosedur pengenceran hingga pengenceran 10^-4.

6. Ambil 1 ml suspensi dari pengenceran terakhir (pengenceran 10^-4), kemudian injeksikan ke hemasitometer dibawah kaca penutup hingga memenuhi chamber.

7. Kemudian letakkan hemasitometer di bawah mikroskop

8. Hitunglah jumlah sel pada 4 kotak besar yeng terletak di sudut dan 1 kotak besar yang tengah.

9. Hasil perhitungan kemudian dimasukkan kedalam rumus berikut untuk mengetahui berapa banyak spora yang kita hitung.